DNA合成仪在分子生物学领域的应用非常广泛,大致可以概括为以下几个方面。
1、合成PCR引物、DNA测序引物和杂交探针
2、合成生物素标记DNA包括生物素标记引物
对于DNA的固相测序(solid-phasesequencing),使用生物素标记的引物进行PCR扩增,然后使用亲和素捕获扩增产物。由于亲和素与磁珠共价结合,扩增产物可以被磁铁吸附捕获,大大简化了DNA测序模板的纯化步骤。此外,生物素标记的探针用于非放射性杂交检测。 DNA合成仪可用于合成生物素标记的探针和引物。
3.合成荧光素标记DNA包括荧光素标记引物
合成的DN A 片段5端可标记几种不同颜色的荧光素(6-FAM、TET、HEX),可用于DNA自动测序仪,也可用于PCR片段大小分析和定量分析,即基因组分析和基因表达水平研究。此外,荧光素标记的探针用于原位PCR杂交检测以定位染色体上的基因。包括荧光素标记引物的荧光素标记DNA可以使用DNA合成仪合成。
4. 合成反义核酸
反义核酸可用于反义调控和基因治疗。反义调控是指体外合成与靶序列互补的DN A 片段,转化细胞后与靶序列结合,即在转录水平抑制基因表达,但由于细胞内的限制酶系统降解外源核酸,反义核酸必须经过硫化修饰,然后才能转化到细胞中。此外,癌症、艾滋病等也可以用反义核酸在基因水平上进行治疗。 DNA合成仪是合成反义核酸的仪器。
5. 磷酸盐标记 DNA 的合成
利用DNA连接酶加入合成的磷酸标记DN A 片段,进行体外基因构建。磷酸盐标记的 DNA 通常由 DNA 合成仪合成。
6. 合成 RNA
用 DNA 合成仪合成的 RNA 主要用于核酶研究。核酶可以作为生物dao弹转化到细胞中,以切割致癌基因等患病基因。
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