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电泳槽的使用方法及注意事项
发布时间:2021-09-02   点击次数:16次

电泳槽的使用方法及注意事项

        所谓电泳是指带电粒子在电场中的运动。由于电荷和分子量不同,不同的物质在电场中以不同的速度移动。根据这一特点,可以利用电泳对不同物质进行定性或定量分析。 ,或某种混合物用于成分分析或单成分提取制备,在临床试验或实验研究中具有极其重要的意义。电泳仪就是根据上述原理设计制造的。下面简单介绍一下它的用法和注意事项。
        如何使用
        1、先用电线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端连接起来,注意不要接反。
         2、将电泳仪的电源开关转到关闭位置,将电压旋钮转到较小的位置,根据工作需要选择电压电流的电压电流范围。
         3. 打开电源,缓慢转动电压调节旋钮,直到达到所需电压,设置电泳终止时间,然后开始电泳。
         4、工作完成后,转动旋钮开关至零位或关闭状态,拔出电泳插头。
        笔记
        1、电泳仪通电进入工作状态后,严禁人体接触电极、电泳物体等可能带电的部位,也不得在电泳槽内取放东西。如有必要,请先关闭电源,以免触电。同时仪表必须有良好的接地端子,防止漏电。
         2、仪器通电后,请勿临时加拔输出引线插头,以防短路。虽然仪器装有保险丝,但短路仍可能对仪器造成损坏。
         3.由于不同介质支撑的电阻值不同,电泳时通过的电流量也不同,游泳速度和到达终点所需的时间也不同。因此,不同介质载体的电泳不应在同一台电泳仪上同时进行。
         4、当总电流不超过仪表额定电流(电流量程较大)时,可以多槽联合使用,但一定要注意不要带载,否则容易影响仪表寿命。
         5、在某些特殊情况下,当需要检查仪器的电泳输入时,允许在稳态下空载开机,但在稳态下开机前必须先接负载,否则电压表指针会跳的很大,容易造成不必要的人机损坏。
         6、在使用过程中如发现异常现象,如巨响、放电、异味等,必须立即切断电源进行维修,以免发生事故。
        夹层式立式电泳槽使用方法:
        一、零部件
        (一)铂丝储罐一对,配备冷却装置和电泳缓冲液出口。
         (二)凹胶框,配玻璃板,可制作厚度分别为1mm和1.5mm的凝胶板。操作时,选择合适厚度的玻璃板和梳子配套使用。
         (3) 样品孔模具(梳子)用于电泳加载。
         (4) 固定储液罐的螺钉和螺母有4对,28D和30型有5对。
         (5) 五个橡胶管。两个长的用来连接冷却水的进出水口;两个中长的用于连接电极缓冲器;介质液体出口;较短的一根用于连接储罐之间的冷却水。
         (六)电线1对。 2. 使用方法
        (一)清洗零件
        上述零件在组装前必须彻底清洁。尤其是玻璃板和凹槽胶框,必须用泡沫海绵蘸少许肥皂粉或清洁剂彻底清洁。清洗干净的玻璃板应放在玻璃板架上,用水晾干后方可使用。
         (二)组装电泳槽
        A. 1、将四颗固定螺丝插入储液架(半上罐)对应的孔中,然后将储液架放在工作台上。
         2、左手握住凹槽胶模框,右手拇指和中指握住玻璃板的两边缘,插入胶模框(注意手指不能碰到玻璃板在胶面上)。
         3、将带玻璃的橡胶模框放在储液罐框架的上侧,其下缘必须与储液罐框架的下缘对齐。
         4. 用双手拿起另一个储液罐架,将其与桌面背面的储液罐架对齐,并在位于储液架有机玻璃架中央的橡胶架上做凸线坦克。
         5. 安装四个螺母并拧紧螺钉。注意拧紧螺丝时用力要均匀,用双手以斜角逐渐拧紧螺丝。
         6. 将电泳槽垂直竖立,放在桌面上。玻璃板较短的储罐称为上罐(阴),玻璃板较长的储罐称为下罐(阳)。它在长玻璃板上。胶框之间有间隙。这个间隙可以沿着长玻璃板的下端用融化的 10% 琼脂填充。为防止气泡滞留,可将一端稍稍抬起,将气泡赶走。琼脂完全凝固后即可倒入凝胶。
         B、也可以垂直竖起凹槽,将装有玻璃的橡胶模框直接放入凹槽中,对称拧紧螺丝,用琼脂封底。
         (3)浇注胶
        1、先浇分离胶,凝固后再浇浓缩胶。灌胶前先连接冷却水,夹住连接上下液槽的两根胶管。
         2、用细尖滴管吸胶,从一端沿长短玻璃板的缝隙加入胶水。为了防止气泡,把另一端稍微拿起(气泡往高处),继续加胶水。对于单层胶(分离胶),加胶量距离短玻璃板顶部0.3厘米左右。轻轻加入少许水,用双手轻轻插入梳子。胶凝后,可以形成一个凹进的样品孔。
         3、为防止漏胶,应立即在上下储液罐中加入蒸馏水,但蒸馏水不能太短于玻璃板边缘。
         4.凝胶凝固后,可以看到样品槽梳子和凝胶板之间有一层亮区
        具有不同的发射率。
         (四)取样
        1. 松开连接上下水箱的两根橡胶管上的夹子,放掉水箱中的蒸馏水,待水流出后再夹上夹子。
         2、用双手轻轻取出样品梳,可以看到清晰的样品孔,并吸去孔内的水分(注意不要损坏孔的字面)。
         3、上下储液罐加慢;中间液体,液体高度应*超过上液罐的短玻璃板边缘。
         4、用微量注射器吸取一定量的样品加入长短玻璃板之间的凹凝胶样品孔中(注意加入样品的动作要轻,针头不能损坏橡胶表面)。
         (五)电泳
        一根储罐线接电泳仪负极,下储罐线接电泳仪正极。检查接线是否正确,即可按要求的电压和电流进行电泳。
         (六)拆胶板
        电泳结束后,松开螺母,取出胶框,撕下玻璃板,在两块玻璃板下角之间的缝隙中,用刀片背面轻轻一撬胶面将玻璃板分开,将带有橡胶板的玻璃板放在桌面上,用双手沿着凝胶底部轻轻握住薄膜,然后将其放入一个大的培养皿中进行染色。漂洗脱色后可以清晰地看到橡胶板。条带分离
        常见问题及解决方法: 1、纹路和拖尾:是样品溶解不良造成的。克服它的方法可以在加样前先离心,加一些尿素等增溶辅助试剂。
         2. 蛋白条带太宽。当连接到相邻泳道的蛋白条带时,由于上样量过大,可以减少上样量。
         3. 电泳时间比平时长。可能是由于凝胶缓冲体系和电极缓冲体系的pH选择错误,即缓冲体系的pH与被分离物质的等电点相差过小,或者被分离物质的离子强度。缓冲系统过高。
         4. 指示器变成微笑符号(指示器正面显示向上的曲线),说明凝胶冷却不均匀,中间部分冷却不好,导致分子的流动性不同。
         5. 由于电泳槽的原因,指示器变成哭脸符号(指示器正面呈向下的曲线)该装置不适用,特别是凝胶和玻璃板组成的“夹心"底部有气泡或隔膜附近的凝胶未完全聚合时。
         6.凝胶时间错误。通常凝胶会在 60 分钟,1 小时内凝固。如果设定时间太慢,可能是TEMEN、APS剂量不够或失效。 APS现在应该准备好使用了,TEMED不稳定,容易被氧化成黄色。如果凝固过快,可能是 APS 和 TEMED 的量过多。这时候凝胶太硬容易开裂,电泳时容易烧坏凝胶。

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