分光光度计的性能检查

        (1)波长校正：在更换光源灯、重新安装、运输或检修后，或仪器不能正常工作时，使用光电比色计或分光光度计进行波长校正。对于正常工作的仪器，应每隔一个月检查一次波长，必要时应进行校准，以确保波长读数与通过样品的波长和仪器的灵敏度一致。方法 常用的光谱钕滤光片校准法适用于721仪器可见光区的波长校准。通常以 585nm 或 529nm 处的吸收峰或 T% 作为标准。鉴于721仪器的发射光波长较宽，573nm和585nm两个峰谷不容易分离，校准时容易出现误差。因此，建议使用 529nm 处的峰值或谷值作为波长校准的标准。校准时，根据需要预热仪器。要求电源电压稳定。将波长板设置在580nm，将T%调到，在比色皿上放一张白纸，观察是否有光强均匀的光斑，边缘无光晕或杂散光。如果不符合要求，调整灯泡位置使之符合要求是对波长校正的粗调。然后将灵敏度设置为“1"（zui低档），将波长刻度盘对准529nm，仪表机械零位为零，光路空白时将T%调整为100%T，检查零点和100%T 反复稳定。将钕光谱滤光片插入光路中，缓慢旋转波长盘，找到透光率zui低的点（左右旋转波长盘时，该点的透光率值增加），这点是波长529nm。检查波长盘的指示值是否为529nm，如果指示值为534nm，此时波长误差为5nm，如果超出规格（±1nm）必须调整。
        调整方法：将波长盘对准529nm，从光路中取出光谱钕滤光片，在光路空白时将仪表指针调至100%T，然后将光谱钕滤光片插入光路。打开仪器左侧的小盖，找到波长校正螺丝（三个中与左手柄长度相同的那个）；逆时针方向调整（负误差为顺时针方向），使仪表指针的T%zui低。反复检查波长误差，直到符合仪器的技术指标。合上左边的小盖，校准结束。
        一些gao端仪器如岛津UV-260双光束分光光度计可以在测量比色池中使用氢灯或光谱钕滤光片。对滤光片扫描程序进行编程后，仪器可在一定波长范围内自动进行波长校正。gao端分光光度计的光学系统密封在一个单元组件中。如果出现故障，波长不准，往往需要请厂家派人维修。还有其他方法如谱线校正法、干涉滤光片校正法和有色溶液校正法等，请参考相关资料。
         (2)线性检查：线性检查包括仪器线性和测量方法线性的检查。线性误差表现为溶液浓度与吸光度的非线性关系，存在正偏差或负偏差现象。这种偏差，根据比尔定律，来自两个方面：一是溶液本身不符合比尔定律，这种现象称为化学偏差；另一种是仪器本身的各种因素的影响，使得吸光度测量值与浓度的关系不是线性的，这种现象称为仪器偏差。这里研究后者。仪器偏差的因素很多，如杂散光、有限带宽、检测器噪声、环境条件变化、波长变化、比色皿误差、辐射的非平行性以及检测器本身的非线性等。
        仪器的线性检查常使用已知在一定波长和一定浓度范围内服从比尔定律的有色物质，并与不同浓度的溶液混合，检查仪器本身是否能如实反映样品的浓度变化。有色物质。该检验方法与被测物质的颜色反应等任何方法学问题无关。根据浓度绘制测量的吸光度，理想情况下应该是一条直线。常用的方法是使用0.8、1.6、2.4、4.0 mg/L Evan Blue浓度系列进行检查，波长为610nm。
         (3)杂散光(散光)检测：在吸光度测量中，检测器感觉到的所有不需要的辐射称为杂散光。杂散光对吸光度测量的准确性有严重影响，但往往被忽视。杂散光的来源包括： ①仪器本身的原因，如单色器的设计、光源的光谱分布、光学原件的老化程度、带宽、仪器内部的反射和散射; ②室内光线过强漏光 仪器与仪器暗室盖板不严密； ③样品本身的原因，如样品是否有荧光，样品的散射能力等。
        杂散光检测法： ① 10±0.1g/L碘化钠溶液可用于紫外区杂散光监测，240nm处测吸光度应大于2.00。另外，也可用12g/Llu化钾溶液测220nm处的透光率，即杂散光量，一般应小于1%T。以上所有测定均使用石英杯进行，并用蒸馏水调零。 ②在可见光区可用光谱钕过滤器或硫酸镍法检查。先用光谱钕滤光片校准波长，然后用黑纸挡住比色皿的光路（进口仪器有比色皿状的黑柱），然后调到0%T，再用空气使空白调整到 100%T。插入光谱钕滤光片，在585nm处测量，测量值为杂散光级。
         (4)比色皿的质量检验：比色皿一般由玻璃、石英或萤石制成，光径为1.0或0.5cm。光线通过时，一部分光线因空气与玻璃接触面的反射而损失（4%），另一部分（很少）被玻璃吸收。除了比色杯的质量，玻璃的厚度均匀，顶部和底部相同，杯子相互匹配。厂家一般供应四件套，杯口上部外侧有一个箭头，箭头用在光源一侧。尽管如此，在使用前应进行质量检查。常用伊文蓝法：将一定量的2.0mg/L伊文蓝溶液倒入比色皿中，比色皿内液面应相等。以比色皿为标准，使用红色滤光片（波长600-610nm），用水校零后将这个杯子的读数调整到50%T，然后读取剩余杯子的透光率。透光率差在±0.5%T以内者为合格。
         (5)稳定性检验：检验方法：将分光光度计及附件接0.5kVA以上可调变压器，先调电压220V，波长固定在650nm，在光路比色杯中装空白液调节时读数为90%T，将电压升到230V再降到190V，观察透光率的漂移值。如果在88.5%～91.5%T之间，则为合格。在电源电压恒定的情况下，3分钟内读数漂移不应超过刻度上限的±0.5%。
         (6) 重复性检验：在波长、工作状态、电源电压、比色皿匹配等合格的前提下进行重复检验。当由交流电源供电时，仪器重复测量的溶液读数之间的差异应小于或等于刻度上限的 1%。测试方法：在120-150摄氏度下干燥分析纯二络合钾2小时，并在干燥器中冷却。称取509.1mg于1000ml容量瓶中，用蒸馏水溶解并加至刻度，混匀（此溶液为180mg/L铬）。所用溶液为 30、60、180 毫克铬/升。取波长440nm，连续测量每个应用溶液的浓度管3-5次，浓度管中的一个误差小于1%T为合格。
         (7)灵敏度检查：将重铬酸钾溶液配制成30和32.5mg铬/L和120和122.5mg/L铬4个应用溶液(两组铬浓度差为2.5mg/L)。波长为440nm，用水调零点，连续测定上述应用溶液的吸光度3次，两组2.5mg/L铬浓度差的吸光度差不小于0.01为合格